在生物学研究中，我们常通过蛋白组学测定酶的表达水平来判断其功能状态。然而，酶的表达丰度≠活性状态。酶可能以失活形式存在，受到抑制剂调控，或通过翻译后修饰调节其功能。因此，“酶活性”才是反映其真实功能状态的关键指标。ABPP（Activity-Based Protein Profiling，基于活性的蛋白质剖析）是一种利用化学探针选择性地标记活性酶的方法，提供了一种特异性强、功能相关性高的酶活性定量手段，用于检测和定量分析复杂样本中酶的活性状态，而不仅仅是表达水平，尤其适用于肿瘤代谢、免疫调控、药物靶点发现等研究场景。因此，用ABPP实现酶活性定量分析成为功能蛋白组学研究的核心需求。

一、ABPP技术原理简述：活性探针的“精准打击”

ABPP依赖于一种叫做“活性位点探针（Activity-Based Probes, ABPs）”的分子。这些探针通常具备三大核心结构：

1、反应基团（warhead）：能与靶酶活性位点（如丝氨酸、半胱氨酸等）形成共价键

2、识别基团：赋予探针酶类选择性（如磷酸酶、蛋白酶等）

3、报告基团：用于后续的荧光检测或富集标记（如生物素、叠氮基等）

只有活性的酶才能与探针发生反应，实现从全蛋白中选择性标记“功能性蛋白”

二、ABPP定量酶活性分析流程

1、样本处理与探针标记

将活细胞裂解液或组织样本与ABPP探针共孵育，使探针特异性标记活性酶。与传统蛋白组不同，这一步强调生理条件下酶活性的原位捕获。

2、富集与蛋白消化

使用探针自带的标签（如biotin）富集已标记酶，随后通过胰蛋白酶消化为肽段，进入质谱分析阶段。

3、LC-MS/MS分析与定量

质谱仪（如Orbitrap Fusion或Q Exactive系列）用于检测活性酶的特异肽段，并通过“标记定量（如TMT）或标签自由定量（Label-free）”方法实现各组间比较。

4、数据解析

结合生物信息学工具，可绘制出差异酶活性热图、KEGG通路富集、靶酶功能注释等。

三、ABPP定量分析的优势与局限

1、优势亮点

（1）专注功能蛋白组：只检测“功能状态”而非“总表达”

（2）动态响应监测：适合药物处理、应激反应等时序研究

（3）与质谱深度整合：高通量、可拓展性强

（4）可结合化学遗传学策略：用于验证酶类靶点的特异性抑制

2、局限挑战

（1）探针开发门槛高：需针对不同酶系设计特异性强的ABPs

（2）难以覆盖非共价活性机制：如部分金属酶

（3）可能存在非特异标记背景：需要严格对照组设计与数据过滤

四、应用场景举例：ABPP助力多领域精准研究

1、药物靶点筛选

通过ABPP技术可捕捉药物处理前后酶活性的动态变化，精准定位潜在靶点或脱靶效应。例如，利用半胱氨酸反应探针分析新型癌症治疗靶点。

2、疾病标志物发现

与传统蛋白质组相比，ABPP筛选出的差异酶活性具有更强的功能相关性，有望用于疾病早期诊断。

3、微生物功能研究

ABPP技术能用于微生物菌群中活性蛋白的定量捕捉，助力环境代谢通路分析、抗生素作用机制等研究。

在百泰派克生物科技，我们提供从探针筛选、样本处理、质谱检测到数据解读的一站式ABPP服务，核心优势包括：高通量Orbitrap平台支持TMT/Label-free定量；定制化探针库适配不同酶类（丝氨酸酶、金属酶等）；生信团队深度参与数据功能挖掘与通路注释；适配多种样本类型：细胞、动物组织、人源临床样本。想进一步了解ABPP质谱定量分析？欢迎联系百泰派克生物科技，我们将为您的研究提供高质量、定制化的技术支持。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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